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引 言

三氯蔗糖，又名蔗糖素，是一種人工合成甜味劑，以蔗糖為原料經(jīng)氯代而制得，具有高甜度、低熱量、安全性高、穩(wěn)定性好等特點(diǎn)。作為低熱量甜味劑或無(wú)糖替代品，三氯蔗糖被廣泛應(yīng)用于食品和飲料中，如無(wú)糖可樂(lè)、乳酸菌飲品、果脯蜜餞、面包餅干、糖果、堅(jiān)果等。世界衛(wèi)生組織 (WHO)、美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局 (FDA) 和歐洲食品安全局 (EFSA) 等權(quán)威機(jī)構(gòu)對(duì)三氯蔗糖的安全性進(jìn)行了評(píng)估，并確認(rèn)其在規(guī)定的攝入量范圍內(nèi)是安全的。另外也有研究指出，三氯蔗糖可能會(huì)對(duì)腸道微生物菌群產(chǎn)生影響，但證據(jù)和結(jié)論尚不明確；在高溫烹飪（如油炸）時(shí)，三氯蔗糖會(huì)生成少量的氯丙醇類有毒物質(zhì)。

GB 2760-2024 進(jìn)一步擴(kuò)大三氯蔗糖的使用范圍和最大使用量

2024 年 2 月 8 日，國(guó)家衛(wèi)生健康委聯(lián)合市場(chǎng)監(jiān)管總局發(fā)布 47 項(xiàng)新食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)和 6 項(xiàng)修改單[1]。時(shí)隔十年，《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn) (GB 2760)》迎來(lái)再次修訂，多種常用食品添加劑調(diào)整了使用范圍和最大使用量，如脫氫乙酸、三氯蔗糖等。其中在加工堅(jiān)果與籽類（食品類別 04.05.02）中三氯蔗糖最大使用量為 1.0 g/kg。

2 月 29 日，國(guó)家衛(wèi)生健康委發(fā)布《關(guān)于石斛原球莖等 23 種“三新食品”的公告》[2]，其中提出三氯蔗糖在帶殼熟制堅(jiān)果與籽類（食品類別 04.05.02.01.01）和脫殼熟制堅(jiān)果與籽類（食品類別 04.05.02.01.02）中擴(kuò)大使用量，最大限量分別為 4.0 g/kg 和 2.0 g/kg。

表 1 GB 2760-2024 三氯蔗糖允許使用范圍以及最大使用量[4]（點(diǎn)擊查看大圖）

表 2 GB 2760-2014 三氯蔗糖允許使用范圍以及最大使用量[5]（點(diǎn)擊查看大圖）

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GB 5009.298-2023 新國(guó)標(biāo)變化[6] [7]

2023 年 9 月 6 日，國(guó)家衛(wèi)生健康委、市場(chǎng)監(jiān)管總局聯(lián)合印發(fā) 2023 年第 6 號(hào)公告[3]，發(fā)布了 85 項(xiàng)食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，其中包含了三氯蔗糖的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)—GB 5009.298-2023。

1. GB 5009.298-2023 于 2023-09-06 正式發(fā)布，2024-03-06 正式實(shí)施；

2. GB 5009.298-2023 代替 GB 22255-2014 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中三氯蔗糖（蔗糖素）的測(cè)定；

3. 相較于 GB 22255-2014，GB 5009.298-2023 增加了第二法 高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法 (HPLC-MS/MS)，修改了第一法 高效液相色譜法 (HPLC-RID&ELSD) 的樣品前處理流程、液相色譜條件及方法檢出限和定量限。

賽默飛新國(guó)標(biāo)應(yīng)對(duì)方案亮點(diǎn)

1.針對(duì)第一法 HPLC-RID，賽默飛實(shí)驗(yàn)室采用 Umisil C18 (3) 色譜柱配合最新款示差檢測(cè)器—VC-D60 進(jìn)行方法復(fù)現(xiàn)，試驗(yàn)結(jié)果表明：三氯蔗糖 (0.10 mg/mL) 色譜峰形良好，不對(duì)稱因子 1.09，柱效優(yōu)異，理論塔板數(shù) 18424；方法靈敏度高，線性低點(diǎn) (0.02 mg/mL) 信噪比為 83.9；線性范圍 0.02-1.00 mg/mL，線性相關(guān)系數(shù) r2≥0.9999；方法重現(xiàn)性和穩(wěn)定性較好，方法檢出限和定量限均滿足標(biāo)準(zhǔn)要求。流動(dòng)相須預(yù)混脫氣后，單通道等度洗脫。

2.針對(duì)第一法 HPLC-ELSD，賽默飛實(shí)驗(yàn)室采用 Hypersil GOLD C18 色譜柱配合電霧式檢測(cè)器—CAD 進(jìn)行方法等效驗(yàn)證，試驗(yàn)結(jié)果表明：三氯蔗糖 (10.0 μg/mL) 色譜峰形良好，不對(duì)稱因子 1.04，柱效優(yōu)異，理論塔板數(shù) 18105；方法靈敏度高，線性低點(diǎn) (1.00 μg/mL) 信噪比為 99.8；線性范圍 1.00-50.0 μg/mL，線性相關(guān)系數(shù) r2≥0.9999；方法檢出限和定量限均優(yōu)于標(biāo)準(zhǔn)要求，可替代 ELSD 檢測(cè)器方法。流動(dòng)相無(wú)須預(yù)混，針對(duì)復(fù)雜基質(zhì)樣品可梯度洗脫。

3. 針對(duì)第二法 HPLC-MS/MS，賽默飛實(shí)驗(yàn)室采用 Accucore C18 色譜柱配合高靈敏度三重四級(jí)桿質(zhì)譜儀—TSQ Altis 進(jìn)行方法驗(yàn)證，試驗(yàn)結(jié)果表明：三氯蔗糖質(zhì)譜參數(shù)經(jīng)優(yōu)化后，保留良好，響應(yīng)優(yōu)異；方法靈敏度高，線性低點(diǎn) (10.0 ng/mL) 信噪比為 206；線性范圍 10.0-500 ng/mL，線性相關(guān)系數(shù) r2≥0.9999；方法檢出限和定量限均優(yōu)于標(biāo)準(zhǔn)要求，可用于陽(yáng)性樣品的定性分析或低濃度樣品的定量分析。

GB 5009.298-2023 賽默飛應(yīng)用解決方案

01 第一法 高效液相色譜法

1.1 HPLC-RID Umisil C18 (3), 5 μm, 4.6×250 mm

圖 1 Thermo Scientific™ Vanquish™ Flex-RID (VC-D60) 液相系統(tǒng)

圖 2 三氯蔗糖標(biāo)準(zhǔn)品溶液分離譜圖及數(shù)據(jù) (0.10 mg/mL)

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圖 3 三氯蔗糖標(biāo)準(zhǔn)品溶液校準(zhǔn)曲線疊加譜圖 (0.02-1.00 mg/mL)（點(diǎn)擊查看大圖）

圖 4 三氯蔗糖標(biāo)準(zhǔn)品溶液線性最低點(diǎn) (0.02 mg/mL) 與空白疊加譜圖（點(diǎn)擊查看大圖）

圖 5 三氯蔗糖標(biāo)準(zhǔn)品溶液連續(xù)進(jìn)樣疊加譜圖 (0.05 mg/mL, n=6)（點(diǎn)擊查看大圖）

圖 6 三氯蔗糖標(biāo)準(zhǔn)品溶液與無(wú)糖可樂(lè)樣品溶液疊加譜圖

（點(diǎn)擊查看大圖）

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1.2 HPLC-CAD Hypersil GOLD C18, 5 μm, 4.6×250 mm

圖 7 Thermo Scientific™ Vanquish™ Core-CAD 液相系統(tǒng)

圖 8 三氯蔗糖標(biāo)準(zhǔn)品溶液分離譜圖及數(shù)據(jù) (10.0 μg/mL)

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圖 9 三氯蔗糖標(biāo)準(zhǔn)品溶液校準(zhǔn)曲線疊加譜圖 (1.00-50.0 μg/mL)（點(diǎn)擊查看大圖）

圖 10 三氯蔗糖標(biāo)準(zhǔn)品溶液線性最低點(diǎn)(1.00 μg/mL)與空白疊加譜圖（點(diǎn)擊查看大圖）

圖 11 三氯蔗糖標(biāo)準(zhǔn)品溶液與無(wú)糖可樂(lè)樣品溶液疊加譜圖

（點(diǎn)擊查看大圖）

圖 12 無(wú)糖可樂(lè)樣品溶液連續(xù)進(jìn)樣疊加譜圖 (n=6)

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02 第二法 高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法

HPLC-MS/MS Accucore C18, 2.6 μm, 4.6×100 mm

圖 13 Thermo Scientific™ Vanquish™ Flex-TSQ Altis™ 液相系統(tǒng)

圖 14 三氯蔗糖標(biāo)準(zhǔn)品溶液提取離子流圖 (100 ng/mL)

（點(diǎn)擊查看大圖）

圖 15 三氯蔗糖標(biāo)準(zhǔn)品溶液校準(zhǔn)曲線提取離子流圖 (10.0-500 ng/mL)（點(diǎn)擊查看大圖）

圖 16 三氯蔗糖標(biāo)準(zhǔn)品溶液線性最低點(diǎn) (10.0 ng/mL) 提取離子流圖（點(diǎn)擊查看大圖）

圖 17 三氯蔗糖標(biāo)準(zhǔn)品溶液連續(xù)進(jìn)樣提取離子流圖 (100 ng/mL, n=6)（點(diǎn)擊查看大圖）

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03 GB 5009.298-2023 相關(guān)色譜耗材推薦

第一法 高效液相色譜法

第二法 高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法

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